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人溶酶體關聯膜蛋白1(LAMP-1)ELISA檢測試劑盒說明書
點選次數✘₪:200 釋出時間✘₪:2022-10-27

本試劑盒只能用於科學研究•╃☁▩₪,不得用於醫學診斷

Human溶酶體關聯膜蛋白1LAMP-1

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)▩✘╃₪│。往預先包被溶酶體關聯膜蛋白1LAMP-1抗體的包被微孔中•╃☁▩₪,依次加入標本•☁₪₪、標準品•☁₪₪、HRP標記的檢測抗體•╃☁▩₪,經過溫育並徹底洗滌▩✘╃₪│。用底物TMB顯色•╃☁▩₪,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色•╃☁▩₪,並在酸的作用下轉化成最終的黃色▩✘╃₪│。顏色的深淺和樣品中的溶酶體關聯膜蛋白1LAMP-1呈正相關▩✘╃₪│。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)•╃☁▩₪,計算樣品濃度▩✘╃₪│。

樣品收集•☁₪₪、處理及儲存方法

1.  血清✘₪:使用不含熱原和內毒素的試管•╃☁▩₪,操作過程中避免任何細胞刺激•╃☁▩₪,收集血液後•╃☁▩₪,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離▩✘╃₪│。

2.  血漿✘₪:EDTA•☁₪₪、檸檬酸鹽或肝素抗凝▩✘╃₪│。3000轉離心30分鐘取上清▩✘╃₪│。

3.  細胞上清液✘₪:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物▩✘╃₪│。

4.  組織勻漿✘₪:將組織加入適量生理鹽水搗碎▩✘╃₪│。3000轉離心10分鐘取上清▩✘╃₪│。

5.  儲存✘₪:如果樣本收集後不及時檢測•╃☁▩₪,請按一次用量分裝•╃☁▩₪,凍存於-20℃•╃☁▩₪,避免反覆凍融•╃☁▩₪,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍▩✘╃₪│。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭✘₪:0.5-10uL•☁₪₪、2-20uL•☁₪₪、20-200uL•☁₪₪、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8℃•╃☁▩₪,使用前室溫平衡20分鐘▩✘╃₪│。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶•╃☁▩₪,這屬於正常現象•╃☁▩₪,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用▩✘╃₪│。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中•╃☁▩₪,密封(低溫乾燥)儲存▩✘╃₪│。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍•╃☁▩₪,最終結果乘以5才是樣本實際濃度▩✘╃₪│。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間•☁₪₪、加液量及順序進行溫育操作▩✘╃₪│。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻▩✘╃₪│。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注✘₪:標準品(S0-S5)濃度依次為✘₪:0•☁₪₪、100•☁₪₪、200•☁₪₪、400•☁₪₪、800•☁₪₪、1600 ng/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋✘₪:蒸餾水按1✘₪:20稀釋•╃☁▩₪,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水▩✘╃₪│。

洗板方法

1.  手工洗板✘₪:甩盡孔內液體•╃☁▩₪,每孔加滿洗滌液•╃☁▩₪,靜置1min後甩盡孔內液體•╃☁▩₪,在吸水紙上拍幹•╃☁▩₪,如此洗板5次▩✘╃₪│。

2.  自動洗板機✘₪:每孔注入洗液350μL•╃☁▩₪,浸泡1min•╃☁▩₪,洗板5次▩✘╃₪│。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條•╃☁▩₪,剩餘板條用自封袋密封放回4℃▩✘╃₪│。

2.  設定標準品孔和樣本孔•╃☁▩₪,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL•╃☁▩₪,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加▩✘╃₪│。

4.  除空白孔外•╃☁▩₪,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL•╃☁▩₪,用封板膜封住反應孔•╃☁▩₪,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min▩✘╃₪│。

5.  棄去液體•╃☁▩₪,吸水紙上拍幹•╃☁▩₪,每孔加滿洗滌液•╃☁▩₪,靜置1min•╃☁▩₪,甩去洗滌液•╃☁▩₪,吸水紙上拍幹•╃☁▩₪,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)▩✘╃₪│。

6.  每孔加入底物A•☁₪₪、B各50μL•╃☁▩₪,37℃避光孵育15min▩✘╃₪│。

7.  每孔加入終止液50μL•╃☁▩₪,15min內•╃☁▩₪,在450nm波長處測定各孔的OD值▩✘╃₪│。

結果判斷

 繪製標準曲線✘₪:在Excel工作表中•╃☁▩₪,以標準品濃度作橫座標•╃☁▩₪,對應OD值作縱座標•╃☁▩₪,繪製出標準品線性迴歸曲線•╃☁▩₪,按曲線方程計算各樣本濃度值▩✘╃₪│。

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試劑盒效能

1.  準確性✘₪:標準品線性迴歸與預期濃度相關係數R值•╃☁▩₪,大於等於0.9900▩✘╃₪│。

2.  靈敏度✘₪:最DI檢測濃度小於1.0 ng/mL▩✘╃₪│。

3.  特異性✘₪:不與其它可溶性結構類似物交叉反應▩✘╃₪│。

4.  重複性✘₪:板內•☁₪₪、板間變異係數均小於15%▩✘╃₪│。

5.  貯藏✘₪:2-8℃•╃☁▩₪,避光防潮儲存▩✘╃₪│。

6.  有效期✘₪:6個月

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