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CCK-8試劑盒的技術流程和使用的注意事項
點選次數▩·₪•◕:125 釋出時間▩·₪•◕:2022-10-28
  CCK-8試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平•·◕✘•。用純化的待測物質抗體包被微孔板✘•✘,製成固相抗體✘•✘,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質✘•✘,再與HRP標記的待測物質抗體結合✘•✘,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物✘•✘,經過*洗滌後加底物TMB顯色•·◕✘•。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色✘•✘,並在酸的作用下轉化成最終的黃色•·◕✘•。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關•·◕✘•。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值)✘•✘,透過標準曲線計算樣品中待測物質濃度•·◕✘•。
  CCK-8試劑盒的技術流程▩·₪•◕:
  1✘✘│、用緩衝液將抗體稀釋至1-10ug/ml•·◕✘•。在反應孔中加0.1ml✘•✘,4℃過夜•·◕✘•。次日✘•✘,棄去孔內溶液✘•✘,用洗滌緩衝液洗3次•·◕✘•。
  2✘✘│、加樣▩·₪•◕:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml於上述已包被之反應孔中✘•✘,置37℃孵育1小時•·◕✘•。然後洗滌•·◕✘•。
  3✘✘│、加酶標抗體▩·₪•◕:於各反應孔中✘•✘,加入新鮮稀釋的酶標抗體0.05ml•·◕✘•。37℃孵育0.5~1小時✘•✘,洗滌•·◕✘•。
  4✘✘│、加底物液顯色▩·₪•◕:於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.1ml✘•✘,37℃ 10~30分鐘•·◕✘•。
  5✘✘│、終止反應▩·₪•◕:於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml•·◕✘•。
  6✘✘│、結果判定▩·₪•◕:可於白色背景上✘•✘,直接用肉眼觀察結果▩·₪•◕:反應孔內顏色越深✘•✘,陽性程度越強✘•✘,陰性反應為無色或極淺✘•✘,依據所呈顏色的深淺✘•✘,以“+”✘✘│、“-”號表示•·◕✘•。也可測OD值▩·₪•◕:在ELISA檢測儀上✘•✘,於450nm處✘•✘,以空白對照孔調零後測各孔OD值✘•✘,若大於規定的陰性對照OD值的2.1倍✘•✘,即為陽性•·◕✘•。
  CCK-8試劑盒使用注意事項▩·₪•◕:
  (1)所有試劑應按照適合溫度儲存•·◕✘•。請勿反覆凍融•·◕✘•。
  (2)使用後均需要對操作區進行消毒✘•✘,消毒方式可以採用75%乙醇或核酸消除劑等•·◕✘•。耗材均需使用商品化的無酶耗材•·◕✘•。
  CCK-8試劑盒樣本注意事項▩·₪•◕:
  (1)細胞在含/不含血清的環境中均可直接使用試劑盒•·◕✘•。
  (2)擴增2kb以內片段✘•✘,細胞樣品濃度不超過1000個細胞•·◕✘•。如若擴增片段超過2kb✘•✘,可適當提高細胞濃度•·◕✘•。
  (3)不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進行處理✘•✘,防止交叉汙染導致檢測結果偏差•·◕✘•。
  CCK-8試劑盒使用過程中注意事項▩·₪•◕:
  (1)PCR過程中推薦使用陰性對照和陽性對照•·◕✘•。
  (2)整個過程中使用的吸頭✘✘│、離心管等耗材應丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中✘•✘,防止形成環境汙染•·◕✘•。
  (4)PCR產物3’末端含有A✘•✘,可直接進行TA克隆•·◕✘•。
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滬公網安備 31011802001678號

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