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小鼠仙台病毒(HVJ)ELISA檢測試劑盒使用說明書
點選次數╃↟↟✘₪:180 釋出時間╃↟↟✘₪:2022-11-15

本試劑盒只能用於科學研究✘•,不得用於醫學診斷

小鼠(Mouse)仙台病毒(HVJ)ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙抗一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)◕•╃▩•。往預先包被仙台病毒的包被微孔中✘•,依次加入標本╃✘、HRP標記的檢測抗體✘•,經過溫育並徹底洗滌◕•╃▩•。用底物TMB顯色✘•,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色✘•,並在酸的作用下轉化成最終的黃色◕•╃▩•。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值)✘•,與CUTOFF值相比較✘•,從而判定標本中仙台病毒(HVJ)的存在與否◕•╃▩•。

樣品收集╃✘、處理及儲存方法

1.  血清╃↟↟✘₪:使用不含熱原和內毒素的試管✘•,操作過程中避免任何細胞刺激✘•,收集血液後✘•,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離◕•╃▩•。

2.  血漿╃↟↟✘₪:EDTA╃✘、檸檬酸鹽或肝素抗凝◕•╃▩•。3000轉離心30分鐘取上清◕•╃▩•。

3.  細胞上清液╃↟↟✘₪:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物◕•╃▩•。

4.  組織勻漿╃↟↟✘₪:將組織加入適量生理鹽水搗碎◕•╃▩•。3000轉離心10分鐘取上清◕•╃▩•。

5.  儲存╃↟↟✘₪:如果樣本收集後不及時檢測✘•,請按一次用量分裝✘•,凍存於-20℃✘•,避免反覆凍融✘•,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍◕•╃▩•。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭╃↟↟✘₪:0.5-10uL╃✘、2-20uL╃✘、20-200uL╃✘、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8℃✘•,使用前室溫平衡20分鐘◕•╃▩•。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶✘•,這屬於正常現象✘•,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用◕•╃▩•。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中✘•,密封(低溫乾燥)儲存◕•╃▩•。

3.  預處理後的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當稀釋以達到試劑盒的的*佳檢測效果◕•╃▩•。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間╃✘、加液量及順序進行溫育操作◕•╃▩•。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻◕•╃▩•。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

陰性對照

0.5mL

0.5mL

陽性對照

0.5mL

0.5mL

檢測抗-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

樣本稀釋液

6mL

3mL

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

 

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋╃↟↟✘₪:蒸餾水按1╃↟↟✘₪:20稀釋✘•,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水◕•╃▩•。

洗板方法

1.  手工洗板╃↟↟✘₪:甩盡孔內液體✘•,每孔加滿洗滌液✘•,靜置1min後甩盡孔內液體✘•,在吸水紙上拍幹✘•,如此洗板5次◕•╃▩•。

2.  自動洗板機╃↟↟✘₪:每孔注入洗液350μL✘•,浸泡1min✘•,洗板5次◕•╃▩•。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條✘•,剩餘板條用自封袋密封放回4℃◕•╃▩•。

2.  設定陰╃✘、陽性對照孔和樣本孔✘•,陰╃✘、陽性對照孔中加入陰性對照╃✘、陽性對照各50μL;

3.  待測樣本孔加待測樣本10μL✘•,再加樣本稀釋液40μL

4.  隨後陰╃✘、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗100μL✘•,用封板膜封住反應孔✘•,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min◕•╃▩•。

5.  棄去液體✘•,吸水紙上拍幹✘•,每孔加滿洗滌液✘•,靜置1min✘•,甩去洗滌液✘•,吸水紙上拍幹✘•,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)◕•╃▩•。

6.  每孔加入底物A╃✘、B各50μL✘•,37℃避光孵育15min◕•╃▩•。

7.  每孔加入終止液50μL✘•,15min內✘•,在450nm波長處測定各孔的OD值◕•╃▩•。

結果判斷

 1.  試驗有效性╃↟↟✘₪:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15◕•╃▩•。

2.  臨界值(Cut off)計算╃↟↟✘₪:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷╃↟↟✘₪:樣品OD值<臨界值(Cut off)✘•,樣品為陰性

4.  陽性判斷╃↟↟✘₪:樣品OD值>臨界值(Cut off)✘•,樣品為陽性

試劑盒效能

1.  準確性╃↟↟✘₪:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15✘•,說明試驗結果有效◕•╃▩•。

2.  特異性╃↟↟✘₪:不與其它可溶性結構類似物交叉反應◕•╃▩•。

3.  重複性╃↟↟✘₪:板內╃✘、板間變異係數均小於15%◕•╃▩•。

4.  貯藏╃↟↟✘₪:2-8℃✘•,避光防潮儲存◕•╃▩•。

5.  有效期╃↟↟✘₪:6個月

2011年開始我們致力於在生命科學領域╃✘、生物醫學實驗外包及論文潤色服務✘•,協助客戶各類實驗服務及論文潤色✘•,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間╃✘、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究✘•,歡迎您與我們聯絡◕•╃▩•。

 

實驗代做服務╃↟↟✘₪:

 

 

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