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綿羊白細胞介素1β(IL-1β)ELISA檢測試劑盒使用說明書
點選次數│··╃◕:170 釋出時間│··╃◕:2022-11-16

本試劑盒只能用於科學研究₪☁₪₪•,不得用於醫學診斷

綿羊Sheep)白細胞介素1β(IL-1β)

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)▩✘。往預先包被白細胞介素1β(IL-1β)抗體的包被微孔中₪☁₪₪•,依次加入標本│☁、標準品│☁、HRP標記的檢測抗體₪☁₪₪•,經過溫育並徹底洗滌▩✘。用底物TMB顯色₪☁₪₪•,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色₪☁₪₪•,並在酸的作用下轉化成最終的黃色▩✘。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素1β(IL-1β)呈正相關▩✘。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)₪☁₪₪•,計算樣品濃度▩✘。

樣品收集│☁、處理及儲存方法

1.  血清│··╃◕:使用不含熱原和內毒素的試管₪☁₪₪•,操作過程中避免任何細胞刺激₪☁₪₪•,收集血液後₪☁₪₪•,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離▩✘。

2.  血漿│··╃◕:EDTA│☁、檸檬酸鹽或肝素抗凝▩✘。3000轉離心30分鐘取上清▩✘。

3.  細胞上清液│··╃◕:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物▩✘。

4.  組織勻漿│··╃◕:將組織加入適量生理鹽水搗碎▩✘。3000轉離心10分鐘取上清▩✘。

5.  儲存│··╃◕:如果樣本收集後不及時檢測₪☁₪₪•,請按一次用量分裝₪☁₪₪•,凍存於-20℃₪☁₪₪•,避免反覆凍融₪☁₪₪•,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍▩✘。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭│··╃◕:0.5-10uL│☁、2-20uL│☁、20-200uL│☁、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8℃₪☁₪₪•,使用前室溫平衡20分鐘▩✘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶₪☁₪₪•,這屬於正常現象₪☁₪₪•,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用▩✘。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中₪☁₪₪•,密封(低溫乾燥)儲存▩✘。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍₪☁₪₪•,最終結果乘以5才是樣本實際濃度▩✘。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間│☁、加液量及順序進行溫育操作▩✘。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻▩✘。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注│··╃◕:標準品(S0-S5)濃度依次為│··╃◕:0│☁、15│☁、30│☁、60│☁、120│☁、240 pg/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋│··╃◕:蒸餾水按1│··╃◕:20稀釋₪☁₪₪•,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水▩✘。

洗板方法

1.  手工洗板│··╃◕:甩盡孔內液體₪☁₪₪•,每孔加滿洗滌液₪☁₪₪•,靜置1min後甩盡孔內液體₪☁₪₪•,在吸水紙上拍幹₪☁₪₪•,如此洗板5次▩✘。

2.  自動洗板機│··╃◕:每孔注入洗液350μL₪☁₪₪•,浸泡1min₪☁₪₪•,洗板5次▩✘。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條₪☁₪₪•,剩餘板條用自封袋密封放回4℃▩✘。

2.  設定標準品孔和樣本孔₪☁₪₪•,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL₪☁₪₪•,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加▩✘。

4.  除空白孔外₪☁₪₪•,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL₪☁₪₪•,用封板膜封住反應孔₪☁₪₪•,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min▩✘。

5.  棄去液體₪☁₪₪•,吸水紙上拍幹₪☁₪₪•,每孔加滿洗滌液₪☁₪₪•,靜置1min₪☁₪₪•,甩去洗滌液₪☁₪₪•,吸水紙上拍幹₪☁₪₪•,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)▩✘。

6.  每孔加入底物A│☁、B各50μL₪☁₪₪•,37℃避光孵育15min▩✘。

7.  每孔加入終止液50μL₪☁₪₪•,15min內₪☁₪₪•,在450nm波長處測定各孔的OD值▩✘。

結果判斷

 繪製標準曲線│··╃◕:在Excel工作表中₪☁₪₪•,以標準品濃度作橫座標₪☁₪₪•,對應OD值作縱座標₪☁₪₪•,繪製出標準品線性迴歸曲線₪☁₪₪•,按曲線方程計算各樣本濃度值▩✘。

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試劑盒效能

1.  準確性│··╃◕:標準品線性迴歸與預期濃度相關係數R值₪☁₪₪•,大於等於0.9900▩✘。

2.  靈敏度│··╃◕:最DI檢測濃度小於1.0 pg/mL▩✘。

3.  特異性│··╃◕:不與其它可溶性結構類似物交叉反應▩✘。

4.  重複性│··╃◕:板內│☁、板間變異係數均小於15%▩✘。

5.  貯藏│··╃◕:2-8℃₪☁₪₪•,避光防潮儲存▩✘。

6.  有效期│··╃◕:6個月

2011年開始我們致力於在生命科學領域│☁、生物醫學實驗外包及論文潤色服務₪☁₪₪•,協助客戶各類實驗服務及論文潤色₪☁₪₪•,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間│☁、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究₪☁₪₪•,歡迎您與我們聯絡▩✘。

 

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