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人纖維連線蛋白1(Fn-1)ELISA檢測試劑盒使用說明書

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詳細介紹

本試劑盒只能用於科學研究│₪•·,不得用於醫學診斷

Human纖維連線蛋白1Fn-1

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)╃☁·。往預先包被纖維連線蛋白1Fn-1抗體的包被微孔中│₪•·,依次加入標本·₪▩₪│、標準品·₪▩₪│、HRP標記的檢測抗體│₪•·,經過溫育並*洗滌╃☁·。用底物TMB顯色│₪•·,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色│₪•·,並在酸的作用下轉化成最終的黃色╃☁·。顏色的深淺和樣品中的纖維連線蛋白1Fn-1呈正相關╃☁·。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)│₪•·,計算樣品濃度╃☁·。

樣品收集·₪▩₪│、處理及儲存方法

1.  血清▩•₪:使用不含熱原和內毒素的試管│₪•·,操作過程中避免任何細胞刺激│₪•·,收集血液後│₪•·,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離╃☁·。

2.  血漿▩•₪:EDTA·₪▩₪│、檸檬酸鹽或肝素抗凝╃☁·。3000轉離心30分鐘取上清╃☁·。

3.  細胞上清液▩•₪:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物╃☁·。

4.  組織勻漿▩•₪:將組織加入適量生理鹽水搗碎╃☁·。3000轉離心10分鐘取上清╃☁·。

5.  儲存▩•₪:如果樣本收集後不及時檢測│₪•·,請按一次用量分裝│₪•·,凍存於-20℃│₪•·,避免反覆凍融│₪•·,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍╃☁·。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭▩•₪:0.5-10uL·₪▩₪│、2-20uL·₪▩₪│、20-200uL·₪▩₪│、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8℃│₪•·,使用前室溫平衡20分鐘╃☁·。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶│₪•·,這屬於正常現象│₪•·,水浴加熱使結晶*溶解後再使用╃☁·。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中│₪•·,密封(低溫乾燥)儲存╃☁·。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍│₪•·,最終結果乘以5才是樣本實際濃度╃☁·。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間·₪▩₪│、加液量及順序進行溫育操作╃☁·。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻╃☁·。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注▩•₪:標準品(S0-S5)濃度依次為▩•₪:0·₪▩₪│、100·₪▩₪│、200·₪▩₪│、400·₪▩₪│、800·₪▩₪│、1600 ng/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋▩•₪:蒸餾水按1▩•₪:20稀釋│₪•·,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水╃☁·。

洗板方法

1.  手工洗板▩•₪:甩盡孔內液體│₪•·,每孔加滿洗滌液│₪•·,靜置1min後甩盡孔內液體│₪•·,在吸水紙上拍幹│₪•·,如此洗板5次╃☁·。

2.  自動洗板機▩•₪:每孔注入洗液350μL│₪•·,浸泡1min│₪•·,洗板5次╃☁·。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條│₪•·,剩餘板條用自封袋密封放回4℃╃☁·。

2.  設定標準品孔和樣本孔│₪•·,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL│₪•·,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加╃☁·。

4.  除空白孔外│₪•·,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL│₪•·,用封板膜封住反應孔│₪•·,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min╃☁·。

5.  棄去液體│₪•·,吸水紙上拍幹│₪•·,每孔加滿洗滌液│₪•·,靜置1min│₪•·,甩去洗滌液│₪•·,吸水紙上拍幹│₪•·,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)╃☁·。

6.  每孔加入底物A·₪▩₪│、B各50μL│₪•·,37℃避光孵育15min╃☁·。

7.  每孔加入終止液50μL│₪•·,15min內│₪•·,在450nm波長處測定各孔的OD值╃☁·。

結果判斷

 繪製標準曲線▩•₪:在Excel工作表中│₪•·,以標準品濃度作橫座標│₪•·,對應OD值作縱座標│₪•·,繪製出標準品線性迴歸曲線│₪•·,按曲線方程計算各樣本濃度值╃☁·。

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試劑盒效能

1.  準確性▩•₪:標準品線性迴歸與預期濃度相關係數R值│₪•·,大於等於0.9900╃☁·。

2.  靈敏度▩•₪:最DI檢測濃度小於1.0 ng/mL╃☁·。

3.  特異性▩•₪:不與其它可溶性結構類似物交叉反應╃☁·。

4.  重複性▩•₪:板內·₪▩₪│、板間變異係數均小於15%╃☁·。

5.  貯藏▩•₪:2-8℃│₪•·,避光防潮儲存╃☁·。

6.  有效期▩•₪:6個月

2011年開始我們致力於在生命科學領域·₪▩₪│、生物醫學實驗外包及論文潤色服務│₪•·,協助客戶各類實驗服務及論文潤色│₪•·,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間·₪▩₪│、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究│₪•·,歡迎您與我們聯絡╃☁·。

 

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