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人溶酶體關聯膜蛋白1(LAMP-1)ELISA檢測試劑盒使用說明書

提 供 商◕↟☁: 上海研謹生物科技有限公司 資料大小◕↟☁:
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詳細介紹

本試劑盒只能用於科學研究₪╃▩₪·,不得用於醫學診斷

Human溶酶體關聯膜蛋白1LAMP-1

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)☁☁·▩。往預先包被溶酶體關聯膜蛋白1LAMP-1抗體的包被微孔中₪╃▩₪·,依次加入標本₪◕·₪、標準品₪◕·₪、HRP標記的檢測抗體₪╃▩₪·,經過溫育並徹底洗滌☁☁·▩。用底物TMB顯色₪╃▩₪·,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色₪╃▩₪·,並在酸的作用下轉化成最終的黃色☁☁·▩。顏色的深淺和樣品中的溶酶體關聯膜蛋白1LAMP-1呈正相關☁☁·▩。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)₪╃▩₪·,計算樣品濃度☁☁·▩。

樣品收集₪◕·₪、處理及儲存方法

1.  血清◕↟☁:使用不含熱原和內毒素的試管₪╃▩₪·,操作過程中避免任何細胞刺激₪╃▩₪·,收集血液後₪╃▩₪·,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離☁☁·▩。

2.  血漿◕↟☁:EDTA₪◕·₪、檸檬酸鹽或肝素抗凝☁☁·▩。3000轉離心30分鐘取上清☁☁·▩。

3.  細胞上清液◕↟☁:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物☁☁·▩。

4.  組織勻漿◕↟☁:將組織加入適量生理鹽水搗碎☁☁·▩。3000轉離心10分鐘取上清☁☁·▩。

5.  儲存◕↟☁:如果樣本收集後不及時檢測₪╃▩₪·,請按一次用量分裝₪╃▩₪·,凍存於-20℃₪╃▩₪·,避免反覆凍融₪╃▩₪·,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍☁☁·▩。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭◕↟☁:0.5-10uL₪◕·₪、2-20uL₪◕·₪、20-200uL₪◕·₪、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8℃₪╃▩₪·,使用前室溫平衡20分鐘☁☁·▩。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶₪╃▩₪·,這屬於正常現象₪╃▩₪·,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用☁☁·▩。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中₪╃▩₪·,密封(低溫乾燥)儲存☁☁·▩。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍₪╃▩₪·,最終結果乘以5才是樣本實際濃度☁☁·▩。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間₪◕·₪、加液量及順序進行溫育操作☁☁·▩。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻☁☁·▩。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注◕↟☁:標準品(S0-S5)濃度依次為◕↟☁:0₪◕·₪、100₪◕·₪、200₪◕·₪、400₪◕·₪、800₪◕·₪、1600 ng/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋◕↟☁:蒸餾水按1◕↟☁:20稀釋₪╃▩₪·,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水☁☁·▩。

洗板方法

1.  手工洗板◕↟☁:甩盡孔內液體₪╃▩₪·,每孔加滿洗滌液₪╃▩₪·,靜置1min後甩盡孔內液體₪╃▩₪·,在吸水紙上拍幹₪╃▩₪·,如此洗板5次☁☁·▩。

2.  自動洗板機◕↟☁:每孔注入洗液350μL₪╃▩₪·,浸泡1min₪╃▩₪·,洗板5次☁☁·▩。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條₪╃▩₪·,剩餘板條用自封袋密封放回4℃☁☁·▩。

2.  設定標準品孔和樣本孔₪╃▩₪·,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL₪╃▩₪·,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加☁☁·▩。

4.  除空白孔外₪╃▩₪·,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL₪╃▩₪·,用封板膜封住反應孔₪╃▩₪·,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min☁☁·▩。

5.  棄去液體₪╃▩₪·,吸水紙上拍幹₪╃▩₪·,每孔加滿洗滌液₪╃▩₪·,靜置1min₪╃▩₪·,甩去洗滌液₪╃▩₪·,吸水紙上拍幹₪╃▩₪·,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)☁☁·▩。

6.  每孔加入底物A₪◕·₪、B各50μL₪╃▩₪·,37℃避光孵育15min☁☁·▩。

7.  每孔加入終止液50μL₪╃▩₪·,15min內₪╃▩₪·,在450nm波長處測定各孔的OD值☁☁·▩。

結果判斷

 繪製標準曲線◕↟☁:在Excel工作表中₪╃▩₪·,以標準品濃度作橫座標₪╃▩₪·,對應OD值作縱座標₪╃▩₪·,繪製出標準品線性迴歸曲線₪╃▩₪·,按曲線方程計算各樣本濃度值☁☁·▩。

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試劑盒效能

1.  準確性◕↟☁:標準品線性迴歸與預期濃度相關係數R值₪╃▩₪·,大於等於0.9900☁☁·▩。

2.  靈敏度◕↟☁:最DI檢測濃度小於1.0 ng/mL☁☁·▩。

3.  特異性◕↟☁:不與其它可溶性結構類似物交叉反應☁☁·▩。

4.  重複性◕↟☁:板內₪◕·₪、板間變異係數均小於15%☁☁·▩。

5.  貯藏◕↟☁:2-8℃₪╃▩₪·,避光防潮儲存☁☁·▩。

6.  有效期◕↟☁:6個月

2011年開始我們致力於在生命科學領域₪◕·₪、生物醫學實驗外包及論文潤色服務₪╃▩₪·,協助客戶各類實驗服務及論文潤色₪╃▩₪·,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

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