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小鼠白細胞介素8(IL-8)ELISA檢測試劑盒使用說明書

提 供 商│▩·☁: 上海研謹生物科技有限公司 資料大小│▩·☁:
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詳細介紹

本試劑盒只能用於科學研究☁▩◕✘▩,不得用於醫學診斷

小鼠Mouse白細胞介素8(IL-8)ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)↟₪。往預先包被白細胞介素8(IL-8)抗體的包被微孔中☁▩◕✘▩,依次加入標本↟·││☁、標準品↟·││☁、HRP標記的檢測抗體☁▩◕✘▩,經過溫育並徹底洗滌↟₪。用底物TMB顯色☁▩◕✘▩,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色☁▩◕✘▩,並在酸的作用下轉化成最終的黃色↟₪。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素8(IL-8)呈正相關↟₪。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)☁▩◕✘▩,計算樣品濃度↟₪。

樣品收集↟·││☁、處理及儲存方法

1.  血清│▩·☁:使用不含熱原和內毒素的試管☁▩◕✘▩,操作過程中避免任何細胞刺激☁▩◕✘▩,收集血液後☁▩◕✘▩,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離↟₪。

2.  血漿│▩·☁:EDTA↟·││☁、檸檬酸鹽或肝素抗凝↟₪。3000轉離心30分鐘取上清↟₪。

3.  細胞上清液│▩·☁:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物↟₪。

4.  組織勻漿│▩·☁:將組織加入適量生理鹽水搗碎↟₪。3000轉離心10分鐘取上清↟₪。

5.  儲存│▩·☁:如果樣本收集後不及時檢測☁▩◕✘▩,請按一次用量分裝☁▩◕✘▩,凍存於-20℃☁▩◕✘▩,避免反覆凍融☁▩◕✘▩,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍↟₪。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭│▩·☁:0.5-10uL↟·││☁、2-20uL↟·││☁、20-200uL↟·││☁、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8℃☁▩◕✘▩,使用前室溫平衡20分鐘↟₪。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶☁▩◕✘▩,這屬於正常現象☁▩◕✘▩,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用↟₪。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中☁▩◕✘▩,密封(低溫乾燥)儲存↟₪。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍☁▩◕✘▩,最終結果乘以5才是樣本實際濃度↟₪。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間↟·││☁、加液量及順序進行溫育操作↟₪。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻↟₪。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注│▩·☁:標準品(S0-S5)濃度依次為│▩·☁:0↟·││☁、7.5↟·││☁、15↟·││☁、30↟·││☁、60↟·││☁、120 pg/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋│▩·☁:蒸餾水按1│▩·☁:20稀釋☁▩◕✘▩,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水↟₪。

洗板方法

1.  手工洗板│▩·☁:甩盡孔內液體☁▩◕✘▩,每孔加滿洗滌液☁▩◕✘▩,靜置1min後甩盡孔內液體☁▩◕✘▩,在吸水紙上拍幹☁▩◕✘▩,如此洗板5次↟₪。

2.  自動洗板機│▩·☁:每孔注入洗液350μL☁▩◕✘▩,浸泡1min☁▩◕✘▩,洗板5次↟₪。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條☁▩◕✘▩,剩餘板條用自封袋密封放回4℃↟₪。

2.  設定標準品孔和樣本孔☁▩◕✘▩,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL☁▩◕✘▩,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加↟₪。

4.  除空白孔外☁▩◕✘▩,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL☁▩◕✘▩,用封板膜封住反應孔☁▩◕✘▩,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min↟₪。

5.  棄去液體☁▩◕✘▩,吸水紙上拍幹☁▩◕✘▩,每孔加滿洗滌液☁▩◕✘▩,靜置1min☁▩◕✘▩,甩去洗滌液☁▩◕✘▩,吸水紙上拍幹☁▩◕✘▩,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)↟₪。

6.  每孔加入底物A↟·││☁、B各50μL☁▩◕✘▩,37℃避光孵育15min↟₪。

7.  每孔加入終止液50μL☁▩◕✘▩,15min內☁▩◕✘▩,在450nm波長處測定各孔的OD值↟₪。

結果判斷

 繪製標準曲線│▩·☁:在Excel工作表中☁▩◕✘▩,以標準品濃度作橫座標☁▩◕✘▩,對應OD值作縱座標☁▩◕✘▩,繪製出標準品線性迴歸曲線☁▩◕✘▩,按曲線方程計算各樣本濃度值↟₪。

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試劑盒效能

1.  準確性│▩·☁:標準品線性迴歸與預期濃度相關係數R值☁▩◕✘▩,大於等於0.9900↟₪。

2.  靈敏度│▩·☁:最DI檢測濃度小於1.0 pg/mL↟₪。

3.  特異性│▩·☁:不與其它可溶性結構類似物交叉反應↟₪。

4.  重複性│▩·☁:板內↟·││☁、板間變異係數均小於15%↟₪。

5.  貯藏│▩·☁:2-8℃☁▩◕✘▩,避光防潮儲存↟₪。

6.  有效期│▩·☁:6個月

2011年開始我們致力於在生命科學領域↟·││☁、生物醫學實驗外包及論文潤色服務☁▩◕✘▩,協助客戶各類實驗服務及論文潤色☁▩◕✘▩,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間↟·││☁、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究☁▩◕✘▩,歡迎您與我們聯絡↟₪。

 

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