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綿羊白細胞介素1β(IL-1β)ELISA檢測試劑盒使用說明書

提 供 商│↟: 上海研謹生物科技有限公司 資料大小│↟:
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詳細介紹

本試劑盒只能用於科學研究◕↟☁,不得用於醫學診斷

綿羊Sheep)白細胞介素1β(IL-1β)

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)↟╃╃╃。往預先包被白細胞介素1β(IL-1β)抗體的包被微孔中◕↟☁,依次加入標本│✘•✘₪、標準品│✘•✘₪、HRP標記的檢測抗體◕↟☁,經過溫育並徹底洗滌↟╃╃╃。用底物TMB顯色◕↟☁,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色◕↟☁,並在酸的作用下轉化成最終的黃色↟╃╃╃。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素1β(IL-1β)呈正相關↟╃╃╃。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)◕↟☁,計算樣品濃度↟╃╃╃。

樣品收集│✘•✘₪、處理及儲存方法

1.  血清│↟:使用不含熱原和內毒素的試管◕↟☁,操作過程中避免任何細胞刺激◕↟☁,收集血液後◕↟☁,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離↟╃╃╃。

2.  血漿│↟:EDTA│✘•✘₪、檸檬酸鹽或肝素抗凝↟╃╃╃。3000轉離心30分鐘取上清↟╃╃╃。

3.  細胞上清液│↟:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物↟╃╃╃。

4.  組織勻漿│↟:將組織加入適量生理鹽水搗碎↟╃╃╃。3000轉離心10分鐘取上清↟╃╃╃。

5.  儲存│↟:如果樣本收集後不及時檢測◕↟☁,請按一次用量分裝◕↟☁,凍存於-20℃◕↟☁,避免反覆凍融◕↟☁,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍↟╃╃╃。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭│↟:0.5-10uL│✘•✘₪、2-20uL│✘•✘₪、20-200uL│✘•✘₪、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8℃◕↟☁,使用前室溫平衡20分鐘↟╃╃╃。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶◕↟☁,這屬於正常現象◕↟☁,水浴加熱使結晶完全溶解後再使用↟╃╃╃。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中◕↟☁,密封(低溫乾燥)儲存↟╃╃╃。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍◕↟☁,最終結果乘以5才是樣本實際濃度↟╃╃╃。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間│✘•✘₪、加液量及順序進行溫育操作↟╃╃╃。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻↟╃╃╃。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備註

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩衝液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注│↟:標準品(S0-S5)濃度依次為│↟:0│✘•✘₪、15│✘•✘₪、30│✘•✘₪、60│✘•✘₪、120│✘•✘₪、240 pg/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋│↟:蒸餾水按1│↟:20稀釋◕↟☁,即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水↟╃╃╃。

洗板方法

1.  手工洗板│↟:甩盡孔內液體◕↟☁,每孔加滿洗滌液◕↟☁,靜置1min後甩盡孔內液體◕↟☁,在吸水紙上拍幹◕↟☁,如此洗板5次↟╃╃╃。

2.  自動洗板機│↟:每孔注入洗液350μL◕↟☁,浸泡1min◕↟☁,洗板5次↟╃╃╃。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條◕↟☁,剩餘板條用自封袋密封放回4℃↟╃╃╃。

2.  設定標準品孔和樣本孔◕↟☁,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL◕↟☁,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加↟╃╃╃。

4.  除空白孔外◕↟☁,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL◕↟☁,用封板膜封住反應孔◕↟☁,37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min↟╃╃╃。

5.  棄去液體◕↟☁,吸水紙上拍幹◕↟☁,每孔加滿洗滌液◕↟☁,靜置1min◕↟☁,甩去洗滌液◕↟☁,吸水紙上拍幹◕↟☁,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)↟╃╃╃。

6.  每孔加入底物A│✘•✘₪、B各50μL◕↟☁,37℃避光孵育15min↟╃╃╃。

7.  每孔加入終止液50μL◕↟☁,15min內◕↟☁,在450nm波長處測定各孔的OD值↟╃╃╃。

結果判斷

 繪製標準曲線│↟:在Excel工作表中◕↟☁,以標準品濃度作橫座標◕↟☁,對應OD值作縱座標◕↟☁,繪製出標準品線性迴歸曲線◕↟☁,按曲線方程計算各樣本濃度值↟╃╃╃。

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試劑盒效能

1.  準確性│↟:標準品線性迴歸與預期濃度相關係數R值◕↟☁,大於等於0.9900↟╃╃╃。

2.  靈敏度│↟:最DI檢測濃度小於1.0 pg/mL↟╃╃╃。

3.  特異性│↟:不與其它可溶性結構類似物交叉反應↟╃╃╃。

4.  重複性│↟:板內│✘•✘₪、板間變異係數均小於15%↟╃╃╃。

5.  貯藏│↟:2-8℃◕↟☁,避光防潮儲存↟╃╃╃。

6.  有效期│↟:6個月

2011年開始我們致力於在生命科學領域│✘•✘₪、生物醫學實驗外包及論文潤色服務◕↟☁,協助客戶各類實驗服務及論文潤色◕↟☁,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間│✘•✘₪、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究◕↟☁,歡迎您與我們聯絡↟╃╃╃。

 

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