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你掌握CCK-8試劑盒的實驗步驟了嗎▩◕✘?
釋出時間↟▩▩·☁:2022-06-14 點選次數↟▩▩·☁:424次
  在CCK-8試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響↟·☁,即加標本和加酶結合物後↟↟✘。抗原抗體反響的完結需求有一定的溫度↟·☁,這一保溫程序稱為溫育↟·☁,有人稱之為孵育↟·☁,在本產品中似不恰當↟↟✘。
  保溫的方法除有的附有特製的電熱塊外↟·☁,一般均選用水浴↟·☁,可將其置於水浴箱中↟·☁,ELISA板底應貼著水面↟·☁,使溫度敏捷平衡↟↟✘。為防止蒸騰↟·☁,板上應加蓋↟·☁,也可用塑膠貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔↟·☁,此刻可讓反響板漂浮在水面上↟↟✘。若用保溫箱↟·☁,本產品應放在溼盒內↟·☁,溼盒要選用傳熱性傑出的資料如金屬等↟·☁,在盒底墊溼的紗布↟·☁,終將ELISA板放在溼紗布上↟↟✘。
  CCK-8試劑盒步驟↟▩▩·☁:
  1▩╃↟₪₪、從室溫平衡20分鐘後的鋁箔袋中取出所需酶標板孔數目↟·☁,剩餘板條用自封袋密封放回4℃↟↟✘。
  2▩╃↟₪₪、標準品和樣本加樣↟▩▩·☁:設定標準品孔和樣本孔↟·☁,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL↟↟✘。樣本孔先加待測樣本10μL↟·☁,再加樣本稀釋液40μL↟·☁,空白孔不加↟↟✘。加樣將樣品加於酶標板孔底部↟·☁,儘量不觸及孔壁↟·☁,輕輕晃動混勻↟↟✘。
  3▩╃↟₪₪、加酶↟▩▩·☁:標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL↟·☁,用封板膜封住反應孔↟↟✘。
  4▩╃↟₪₪、溫育↟▩▩·☁:37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60分鐘↟↟✘。
  5▩╃↟₪₪、配液↟▩▩·☁:將20X濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍後備用↟↟✘。
  6▩╃↟₪₪、洗滌↟▩▩·☁:小心揭開封板膜↟·☁,棄去液體↟·☁,吸水紙上拍幹↟·☁,每孔加滿洗滌液↟·☁,靜置1min↟·☁,甩去洗滌液↟·☁,吸水紙上拍幹↟·☁,如此重複洗板5次↟↟✘。
  7▩╃↟₪₪、顯色↟▩▩·☁:每孔加入底物A▩╃↟₪₪、B各50μL↟·☁,輕輕震盪混勻後↟·☁,37℃避光孵育15min↟↟✘。
  8▩╃↟₪₪、終止↟▩▩·☁:每孔加入終止液50μL↟·☁,終止反應↟·☁,此時藍色立刻轉為黃色↟↟✘。
  9▩╃↟₪₪、測定↟▩▩·☁:以空白孔調零↟·☁,15分鐘內在450nm波長處測定各孔的吸光度(OD值)↟↟✘。

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