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速來看看CCK-8試劑盒的操作步驟
釋出時間▩✘:2022-09-16 點選次數▩✘:303次
  CCK-8試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標準品▩↟·•·、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測☁☁✘◕。先將生物素標記的抗體同時溫育☁☁✘◕。洗滌後·◕☁·↟,加入親和素標記過的HRP☁☁✘◕。再經過溫育和洗滌·◕☁·↟,去除未結合的酶結合物·◕☁·↟,然後加入底物A▩↟·•·、B·◕☁·↟,和酶結合物同時作用☁☁✘◕。產生顏色☁☁✘◕。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關係☁☁✘◕。
  CCK-8試劑盒的操作步驟▩✘:
  1▩↟·•·、配製瓊脂糖EB凝膠,電泳以分離DNA片段☁☁✘◕。任何型別或等級的瓊脂糖都可以使用☁☁✘◕。
  我們強烈的推薦使用新鮮的TAE/TBE電泳緩衝液☁☁✘◕。不要重複使用電泳緩衝液·◕☁·↟,舊的電泳緩衝液PH會增加而降低DNA的回收產量;
  2▩↟·•·、電泳足夠時間後·◕☁·↟,在紫外燈下小心地把所需的DNA的片段切下來☁☁✘◕。並儘量去除多餘的凝膠☁☁✘◕。
  注意:DNA在紫外燈下的曝光的時間不要超過30秒·◕☁·↟,同時在紫外燈下操作的時候一定要戴保護眼鏡☁☁✘◕。
  3▩↟·•·、稱取空離心管的重量·◕☁·↟,切下帶目的片段的凝膠裝在1.5ml離心管中並稱其重量·◕☁·↟,求出凝膠塊的重量·◕☁·↟,近似地確定其體積☁☁✘◕。一般情況下·◕☁·↟,凝膠的密度為1g/ml·◕☁·↟,於是凝膠的體積與重量的關係可按下面換算:凝膠薄片的重量為0.2g則其體積為0.2ml;加入等倍凝膠體積的BindingBuffer·◕☁·↟,把混合物置於55℃~65℃水浴中溫浴7min至凝膠*融化·◕☁·↟,其間每隔2-3分鐘混勻一次;
  重要提醒:在凝膠*溶解之後·◕☁·↟,注意凝膠-BindingBuffer混合物的pH值☁☁✘◕。如果其pH值大於8的話·◕☁·↟,DNA的產量將大大減少☁☁✘◕。觀察混合物的顏色·◕☁·↟,如果是橙色或紅色·◕☁·↟,則要加入5μl濃度為5M·◕☁·↟,pH為5.2的醋酸鈉·◕☁·↟,以調低其pH值☁☁✘◕。經過這一調節·◕☁·↟,該混合物的顏色將恢復為正常的淺黃色☁☁✘◕。一般情況下·◕☁·↟,使用新鮮的電泳緩衝液·◕☁·↟,凝膠-Bindingbuffer混合物的PH值的不會升高;
  4▩↟·•·、轉移700μl的DNA-瓊脂糖溶液到一個HiBindTMDNA柱子·◕☁·↟,並把柱子裝在一個乾淨的2ml收集管內·◕☁·↟,室溫下·◕☁·↟,10,000×g離心1min·◕☁·↟,棄去液體☁☁✘◕。
  一個HiBindDNA柱子最多可容納700μl的溶液·◕☁·↟,如果DNA-瓊脂糖混合物的體積大於700μl·◕☁·↟,可先轉移700μl溶液至柱子·◕☁·↟,離心完後·◕☁·↟,將餘下的溶液繼續加上柱子上☁☁✘◕。但是每一個HiBindTM柱子最多可以結合25~30μgDNA☁☁✘◕。如果預期產量較大·◕☁·↟,則把樣品分別加到合適數目的柱中☁☁✘◕。
  5▩↟·•·、將柱子重新套回收集管中·◕☁·↟,加300μlBindingBuffer至HiBindDNA柱子中;室溫下·◕☁·↟,10,000×g離心1分鐘·◕☁·↟,去棄濾出液;這一步相當關鍵·◕☁·↟,不要忽略此步☁☁✘◕。
  6▩↟·•·、將柱子重新套回收集管中·◕☁·↟,加入700μlSPWWashbuffer至HiBindDNA柱子中·◕☁·↟,室溫下·◕☁·↟,10,000×g離心1分鐘·◕☁·↟,去棄濾出液;注:SPWWashbuffer在使用前必須按瓶子標鑑要求用無水乙醇進行稀釋☁☁✘◕。
  7▩↟·•·、將柱子重新套回收集管中·◕☁·↟,重複加入700μlSPWWashbuffer至HiBindDNA柱子中·◕☁·↟,室溫下·◕☁·↟,10,000×g離心1分鐘·◕☁·↟,去棄濾出液;
  8▩↟·•·、棄去液體·◕☁·↟,將空柱子重新套回收集管中·◕☁·↟,10,000×g離心1min以甩幹柱基質殘餘的液體☁☁✘◕。
  這步可以去除柱子基質上殘餘的乙醇·◕☁·↟,不要省略此步―――對得到好的DNA產量是十分重要的☁☁✘◕。
  9▩↟·•·、把柱子裝在一個乾淨的1.5ml離心管上·◕☁·↟,加入30~50μl洗脫液或滅菌水上柱子膜上·◕☁·↟,10,000×g離心1分鐘·◕☁·↟,離心管中的溶液就是純化的DNA產物·◕☁·↟,保存於-20度☁☁✘◕。

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